Витек краб: Продукты с бесплатной доставкой на дом за 60 мин из Перекрёстка

Содержание

Витёк Краб

Личная информация

Деятельность

скрыта или не указана

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Интересы

скрыты или не указаны

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Любимая музыка

скрыта или не указана

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Любимые фильмы

скрыты или не указаны

Можно редактировать:

да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Любимые телешоу

скрыты или не указаны

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Любимые книги

скрыты или не указаны

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности:

да


Любимые игры

скрыты или не указаны

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Любимые цитаты

скрыты или не указаны

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


О себе

скрыто или не указано

Можно редактировать:

да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Анекдот №-9957813 Возвращается моряк большого рыболовецкого корабля из долгого…

Возвращается моряк большого рыболовецкого корабля из долгого похода.
Решил жене сделать подарок. Взял большого краба, высушил его вылакировал
и жене повез в подарок.
Выходит он с корабля по трапу. Навстречу портовый грузчик: Грузчик:
Мужик а это, что у тебя?
Моряк: С удовлетворением и мечтательной улыбкой от ожидаемой встречей с
любимой женой — Это краб, сам ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене
везу в подарок.
Выходит мужик из порта, садится в такси. Таксист у него и справшивает: —
Мужик, а что это у тебя такое?
Моряк с тем же выражением лица и интонацией: Это краб, сам ловил, сам
сушил, сам лакировал. Вот жене везу в подарок.
Приезжает моряк в аэропорт. На таможне его спрашивает таможник: Мужик, а
что это у тебя?
Моряк с тем же выражением лица, но уже слегка раздраженно: Это краб, сам
ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене везу в подарок.
Заходит моряк в самолет, там стюардесса его спрашивает: Мужчина, а что
это у вас?
Моряк, уже с другим выражением лица, но спокойным голосом отвечает: Это
краб, сам ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене везу в подарок.
Прилетает моряк в родной город, таксист его справшивает? Мужик, а что
это у тебя такое?
Моряк, слегка повышенным тоном, раздраженно и отрывисто: Это краб, сам
ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене везу в подарок.
Приезжает моряк к подъезду, на лавочке сидят бабульки.
Бабульки: Витек, это что у тебя такое?
Моряк бешено вращая глазами и краснея, всеми силами стараясь не
сорваться на крик: Это краб, сам ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот
жене везу в подарок!
Поднимается моряк по лестнице. Навстречу сосед. Здорово Витек! А что это
у тебя такое?
Моряк: Красный как рак из последних сил сдерживаясь, тресясь и сжимая
кулаки: Это краб, сам ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене везу в
подарок!
Поднялся моряк на этаж, звонит в звонок. Жена взглянув в глазок
открывает дверь: Радостным голосом: Витенька любимый, что это у тебя
такое?
Тут моряк не выдерживает: — МАН-ДА-ВОШКА!!!!!!!

+122–

Владислав Крапивин — Синий краб » Страница 105 » Каждый день читать книги онлайн бесплатно без регистрации

Витька говорит: —

— Катись давай…

— Боишься?

Витька плюнул в лужу.

— На «слабо» дураков ловят.

Я вздохнул, покатал мяч ногой, говорю опять:

— Я бы и сам пнул, только у меня удар левой не отработан. А на правой палец болит. Я на тебя так надеялся…

Витьку наконец задело.

— Чего тебе этот Котька сделал? Напинал, что ли?

— Ха, «напинал»! Он и не умеет… Так, личные причины.

— А-а, — сказал Витька. Посмотрел, открыта ли дверь в подъезде, потом опять прищурился, на Котьку глянул. И говорит:

— Отвечать будешь ты.

— Буду я.

Он отошел, разбежался и ка-ак вдарит! Мяч даже зашипел в воздухе. И влепился! Только не в Котьку, а в ствол нашего тополька, между Котькой и Мариной.

И на них с листьев — целые миллионы капель!

Марина, конечно, в крик:

— Хулиганы! Алька, вот увидишь, дома тебе достанется!

Ну и пусть. Она всегда так кричит. Воспитанный Котька показал нам кулак и стал что-то говорить Марине.

Я поглядел на Витьку, а он стоит злой и ни на кого не смотрит. Конечно, обидно же: хвастал, что в Котьку попадает, а попал в дерево.

Мне его жалко стало. Я говорю:

— Ты, Витька, молодец. Правильно, что в тополь засадил. Сразу двоих окатило.

У Витьки лицо такое сделалось, будто он хотел заулыбаться, но сдержался.

— Конечно, Алька, правильно. Рубаху-то зачем ему портить. Небось не сам покупал, а родители.

Я говорю:

— Конечно.

А Марина с Котькой в это время стоят и о чем-то спорят. Он ее за руку взял, а она руку вырвала. Я услыхал:

— Куда теперь в таком виде!

Котька рукой махнул:

— Ерунда. Обсохнем.

— Тебе ерунда, а у меня искусственный креп-жоржет, он от дождя тут же садиться… Сейчас я ему!

Это уже не креп-жоржету, а мне. Или Витьке. Обоим.

Я говорю:

— Не догонишь!

Котька еще что-то хотел ей сказать, а она повернулась и пошла домой. Котька подумал, дал по нашему мячу изо всех сил, и за Мариной.

Витька меня спросил:

— Попадет дома-то?

— Поживем-увидим…

Тут во двор выскочили Женька и Валерка. Валерка сияет весь, как солнце, которое в асфальте отражается. Майка на нем чистая и даже сухая — видать, утюгом сушили.

Женька говорит:

— Может опять, корабль сделаем?

Но Витька не захотел:

— Лучше пока в подъезде укрыться. Минуток на десять. На всякий случай. Мало ли что…

Мы укрылись в Женькином. И правильно сделали. Только спрятались, слышу — Марина кричит из окна:

— Алька, марш домой!

Мы молчим.

Она снова:

— Александр! Домой немедленно! Кому говорю!

А я не пошел. Да и не высунулся из подъезда! Потому что опять примчался солнечный дождик! Вон как припустил! Большие капли, словно ягоды, сыплются с неба, скачут по синему асфальту…

Котька Василевский снова поднялся со стула, снова посмотрел на часы. И снова сказал очень нерешительно:

— Ладно… Я, наверно, пойду.

Алька ничего не имел против: Котька надоел ему до чёртиков. Но Алька стеснялся так вот просто взять и сказать: «Ладно, иди». Ему казалось, что высокий и серьёзный Котька сразу разглядит через очки Алькины тайные мысли. И Алька скрепя сердце опять предложил:

— Посиди ещё. Может, она скоро придёт.

Котька поспешно согласился и вновь сел на стул ждать Марину. Он пришёл к ней, чтобы взять какую-то книжку, но Марина застряла на репетиции в драмкружке.

Алька уже кончил делать уроки. Он старательно, по складам, прочитал в букваре заданный на дом рассказ из двух строчек. В рассказе говорилось, как мама мыла Лару. Покончив: с этим делом, Алька сел к окну и стал читать «Приключения Тома Сойера».

Но Котька мешал Альке. Правда, сидел он тихо, но зато иногда печально вздыхал. Эти вздохи раздражали и смущали Альку: будто он был виноват, что Котьке скучно.

Алька отложил книгу, с тихой яростью покосился на Котьку и стал думать, чем занять его. Чтобы не вздыхал…

Он наконец придумал. С нижней полки на этажерке, из-под стопки книг, Алька вытянул и грохнул на пол пыльный плюшевый альбом.

— Во, смотри. Тут фотокарточки разные.

В альбоме сначала шли снимки маминых бабушки и дедушки. Эти карточки были тяжёлые и толстые, как авиационная фанера. Внизу их украшали оттиснутые золотом медали с какими-то царями и орлами. Потом в альбоме были карточки Алькиного папы, совсем маленького, на деревянной лошадке; Алькиной мамы в пионерском галстуке… В общем, много чего там было…

Пока несчастный Котька вежливо и уныло разглядывал Алькиных прабабушку, прадедушку и папу на лошадке, Алька читал спокойно.

И вдруг стало удивительно тихо. Котька уже не шелестел листами и даже не вздыхал. Он дошёл до последних страниц альбома. Там Котька увидел снимок Марины. Марина сфотографировалась совсем недавно. Из-под вязаной шапки чёлка торчит, глаза прищурены. А на губах улыбка…

— Алька, — сказал Котька, будто между прочим, — ты бы дал мне эту карточку, Алька…

— Зачем? — удивился Алька.

Котька поправил очки и что-то пробормотал. Но потом увидел, что Альке этого мало, и стал объяснять:

— Видишь ли… У нас в классе к празднику стенгазета выйдет. А в ней статья будет — «Наши активисты». Мы туда снимок и прилепим. Марина ведь знаешь какая активная!..

— Активная, — сумрачно согласился Алька. — Я-то знаю. Пронюхает, что я карточку отдал, тогда мне от её активности житья не будет. Ты уж сам у неё проси.

— Нет, — сказал Котька. — Это надо сделать, чтоб ей сюрприз был. А альбом ты сунь пока подальше, чтобы она не увидела.

Алька молчал.

Котька тоже молчал. Потом он полез в карман и достал серебристый самолётик, сделанный из расплющенной алюминиевой проволоки.

— Хочешь, подарю?

— А я тебе карточку? — язвительно спросил Алька.

Котькины уши порозовели. Но он сказал:

— Ты, очевидно, жуткий эгоист: ты не хочешь, чтобы твою сестру увидели в газете.

В Алькиной душе вдруг шевельнулись угрызения совести. Ведь Марина и вправду его сестра, а он не хочет, чтобы она прославилась.

— Тогда забирай просто так, — сказал он со всей решительностью. И покосился на самолёт. У самолёта были стремительно откинутые крылья, красивые, хоть совсем маленькие.

— Отлично, — обрадовался Котька и заторопился уходить. — А самолёт ты бери. Тоже просто так. Согласен?

И Алька сказал:

— Согласен.

Это случилось недели через две. Марина пришла из школы какая-то слишком радостная. Будто сразу тря пятёрки притащила. Она всё равно, конечно, старалась быть серьёзной, но иногда забывала. Тогда губы её начинали улыбаться, а ноги даже чуть-чуть пританцовывали. Когда садились обедать и Марина принесла на стол вместо хлеба банку с фаршированным перцем, мама забеспокоилась:

— Ты определённо больна. Что с тобой?

Мама работала старшей медсестрой в поликлинике и поэтому, наверное, всегда боялась болезней.

— Нет, — понял папа, который был человеком проницательным. — В ней просто бурлит тайная радость. Но интересно, почему?

Марина изо всех сил постаралась насупиться.

— Да ну их… этих дурней из редколлегии.

Написали в стенгазету чушь какую-то… Называется «Наши активисты». И про меня там нагородили…

— О, поздравляю! — сказал папа.

— Да, тебе смешно, а мне-то нет. Расписали так, что неудобно даже. Будто уж я такая хорошая. Лучше всех!

— Глупости, — твердо сказала мама. — Почему неудобно, если всё правильно?

Алька ел суп и сиял. Всё-таки он ведь тоже кое-что сделал для Маринкиной радости. И сейчас уж можно было открыть секрет.

— Маринка… — хитро прищурился Алька. — А я ведь знаю. Карточка всем понравилась. Ага?

Алька даже забыл, что сам он не любил эту карточку.

Марина подняла тонкие брови: не поняла.

— Ну, твоя фотокарточка… В газете.

— Там, по-моему фотографий нет. Вот ещё, — дёрнула она плечом. — Не про одну же меня писали. Пришлось бы полкласса снимать.

Алька всё ещё улыбался:

— Да нет же, тебя не надо было снимать. Я же твою карточку давал…

Марина вонзила в Альку строгий взгляд:

— Что, что?

— Да-вал… — нерешительно протянул Алька. — Котьке. То есть Косте. Он просил для газеты…

Марина со звоном положила ложку:

— Для газеты?! Просил, да? А ты…

— Ты, Марина, завтра спроси, почему снимок не наклеили. Раз брали в газету, пусть помещают, — вмешалась мама.

Она была человеком решительным. Все медсестры должны быть решительными. Иначе, говорила мама, их ждёт каторжная жизнь.

— М-м… — заметил папа. — А может быть, редактор и не собирался давать снимок в печать. Бывают странные редакторы.

Марина взвилась на стуле:

— И ничего… подобного! И неправда!

Алька подумал, что она вот-вот заревёт. Но Марина просто выскочила из-за стола и ушла в другую комнату. Алька побежал за ней.

Читать 👀 онлайн 📲 Синий краб

Плюшевый заяц

Витька Капустин пришёл к Альке, чтобы попросить какой-нибудь ключ. Надо было отпереть кладовку, а свой ключ Витька потерял.

— Ну-ка, поищи, Цапля. Может, подберём, — сказал он.

Витька всегда называл Альку Цаплей. Неизвестно, за что. Не такой уж Алька худой и длинный. Но он не спорил. С Витькой лучше не связываться. Ладно, если просто по хребту заработаешь, а может случиться хуже. Противно ухмыляясь, Витька расскажет при всех ребятах про тебя что-нибудь такое, что просмеют насквозь. И не докажешь, что всё это — Витькино враньё…

— Сейчас поищем ключи, — сказал Алька и вытянул из-под кровати картонную коробку. Когда-то в ней лежали пачки с печеньем «Крокет», целых триста пачек. А сейчас там хранились Алькины вещи.

Здесь Витька и увидел зайца.

Заяц лежал на диване из строительных кубиков. Здесь же лежали старые коньки, дырявая грелка, сломанный будильник, фильмоскоп, но Витька, как назло, сразу же заметил зайца.

— Х-хе, — сказал Витька и поднял зайца за левое ухо. — Ты, Цапля, в куклы ещё играешь, да?

— Никогда я в куклы не играю, — испугался Алька. — Это же заяц, а не кукла. Ты хоть посмотри хорошенько.

Витька противно улыбнулся, встряхнул зайца так, что у того дёрнулись все четыре лапы, и уверенно произнёс:

— Ну и что? Всё равно кукла.

Он снова хехекнул. Наверное, подумал, как он расскажет во дворе, что Цапля играет в куклы.

Алька покраснел.

— Я и этим зайцем не играю… — пробормотал он. — Это я… когда маленький был… Ну, вот такой. — Он опустил почти к самому полу ладонь. — Давай, Витька, лучше спрячем его. Лучше будем ключ искать.

Но Витька будто забыл про ключ. Он поднял зайца ещё выше и прищурился.

У зайца была грустная морда. Наверно, потому, что на морде сохранился только один блестящий стеклянный глаз. Второй глаз оказался нарисованным химическим карандашом. Лапы у зайца были совсем не заячьи, а какие-то медвежачьи: толстые и мягкие, с чёрными пятачками пяток и пальцев. Красные штаны на зайце выцвели и потрепались. Раньше у него была ещё синяя кофта, но потом потерялась. Белая плюшевая шкура на спине и животе давно уже стала серой. И хотя наступила зима и недавно выпал первый снег, все понимали, что зайцу уже не побелеть.

— Он тебе для чего, Цапля? — спросил наконец Витька.

— А зачем ему быть «для чего»? Лежит и пускай лежит, — осторожно сказал Алька. Он почуял в Витькиных словах какую-то угрозу для зайца.

А Витька ещё раз тряхнул несчастного зверя и предложил:

— Давай мы с ним какую-нибудь сделаем штуку.

Алька исподлобья глядел, как заяц раскачивается на длинном ухе.

— Какую штуку?

— Х-хе… Весёлую.

Алька не хотел делать «весёлую штуку». Пожилой плюшевый заяц был его другом. Он знал много Алькиных тайн. И неизвестно, сколько слез впитала пыльная плюшевая шкура, когда в несчастливые минуты Алька рассказывал зайцу о своих горестях.

Это был хороший друг, молчаливый, добрый. Он не обижался, если Алька превращал его в циркового гимнаста, в охотничью дичь или даже в подводное чудовище, когда играли в «морское царство». Не обиделся он и тогда, когда Алька вытащил у него один глаз, чтобы сделать кнопку для звонка. Что ж, раз это нужно для важного дела…

Но Алька не знал, согласен ли заяц участвовать в Витькиной «весёлой штуке». Наверное, нет. Он посмотрел на грустную плюшевую морду с обвисшими усами. И он понял, что если отдаст зайца безжалостному Витьке Капустину, это будет предательством.

Но что сказать, Алька не знал. Если говорить честно, заяц был всё-таки куклой. Не мог же Алька признаться, что жалеет куклу!

Он тоскливыми глазами смотрел, как Витька понёс зайца к окну. Взрослых в квартире никого не было, вот Витька и хозяйничал, как дома. Он залез с ботинками на подоконник. Открыл форточку. Просунул руку с зайцем на улицу. Несколько секунд заяц качался за окном. Потом Витька разжал пальцы.

— Эй! Хватайте! — заорал он.

Недалеко от гаража, рядом с укутанным в снег рябиновым кустом, двое мальчишек лепили снежную бабу. Дело что-то не клеилось. Снег был не очень липкий, рассыпался. Чтобы хоть как-нибудь кончить работу, бабу долепили наскоро. Она вышла маленькая, просто снежная карлица. Ваське Клопикову — до второй пуговицы на пальто, а Мишке Бородулину — всего до пояса.

Мишка сорвал с рябинки две ягоды — сделал бабе глаза. Васька воткнул нос — крючковатый сучок. Потом щепкой прорезал рот. Васька не очень старался, и получилось, что один угол рта загибался вверх, другой — вниз. Снеговиха улыбалась ехидной кривой улыбкой и смотрела красными злыми глазами. Она злилась на весь свет за то, что сделали её такой маленькой.

— Что-то не так, — задумчиво сказал Васька.

Мишка тоже хотел сказать что-нибудь такое же умное, но тут раздался крик, и Мишку по голове что-то стукнуло. Мишка икнул и сел на снег.

Потом он говорил, что сел не от испуга, а просто так, но, конечно, врал.

На снегу рядом с собой Мишка увидел старого плюшевого зайца. Мишка просто озверел. Он вскочил и так дал по зайцу ногой, что бедняга свечой взвился в небо.

— Ура! — взвизгнул Васька и отпасовал зайца Мишке.

Мишка подумал и снова дал ногой… Когда Витька и Алька выбежали во двор, Витька с удовольствием заметил:

— Идёт дело.

Заяц летал, как будто он был не заяц, а птица. Это, наверное, Витька и считал «весёлой штукой».

— Чей такой длинноухий? — отдышавшись, спросил Васька. Витька кивнул на Альку:

— Был его. А теперь станет опчий.

Он велел разделиться на две команды. Алька попал к Мишке, и тот поставил его в «ворота». «Ворота» были между рябиновым кустом и ехидной бабой-снеговихой. Витька начал игру. Он ударил зайца ботинком и сказал:

— Бэмм!

Мишка Бородулин ударом головы послал зайца к Васькиным «воротам» и тоже сказал:

— Бамм!

Заяц летал, беспомощно переворачиваясь в воздухе и болтая ногами в красных выцветших шароварах… А что он мог сделать?

Алька стоял, опустив руки, и моргал при каждом ударе. Ему было жалко плюшевого зверя, как живого. И ещё Алька чувствовал себя так, будто обманул хорошего человека или что-нибудь украл…

Но до Альки никому не было дела. Только снеговиха глядела на него красными глазками и злорадно усмехалась.

Витьке не везло. Его вратарь, Васька Клопиков, уже «слопал» четыре гола.

— Ты, Клопик, не вратарь, а пробоина, — ругался Витька. Потом он сказал Мишке: — Если ты, Борода, будешь плечом пихаться, то обязательно, заработаешь…

Наконец Витьке удалось Мишку обвести. Он с размаху засадил «девятку» в Алькины «ворота». Но промазал. Заяц застрял в заснеженных ветках рябины.

И Алька схватил зайца.

Он крепко держал его.

— Ну! — злой из-за промаха, крикнул Витька.

Алька растерянно поглядел на него. И на Мишку. И на Ваську Клопика. А они ждали. Им-то что было до Алькиной жалости?

На Витькином лице вдруг стала расползаться улыбка, будто он уже собрался сказать: «Х-хе…»

И Алька предал зайца.

Он съёжился, зажмурился и ударил зайца ногой. Потом он открыл глаза и отвернулся, чтобы не видеть, как заяц летит. На Альку смотрела снеговиха, кривила рот в ехидной улыбке.

— Дура! — сказал Алька и всхлипнул. Потом он взглянул на ребят, потому что стало вдруг тихо. Мальчишки стояли в кучке. Заяц лежал на снегу, беспомощно раскинув лапы с суконными пятачками пальцев. Из разорванного плюшевого живота торчал клок серой ваты. Тогда Алька бросился к зайцу, чтобы спасти его. Витька увидел Альку и, наверно, что-то понял. Поэтому плюхнулся на зайца животом.

— Опчий заяц! — заорал Васька Клопик и упал на Витьку.

— Руками! Нечестно играете! — крикнул Мишка и потянул Витьку за ботинок.

Витька поднялся на четвереньки. Алька хотел улучить момент и вырвать зайца. Но тут случилось удивительное.

В Витьку, чуть пониже хлястика на его пальто, с размаху упёрся большой подшитый валенок.

Витька с четверенек снова лёг на брюхо.

Рядом с Алькой стоял Лапа, а рядом с Лапой стоял Валерка. На круглом Валеркином лице не было добродушия. На нём была жажда мести.

— Он всегда к Альке пристаёт, — сказал Валерка. — И дразнится. Дай ему, Лапа.

Первым очухался Мишка и робко произнёс:

— Ты, Лапа, катись…

— Пришёл не в свой двор, да ещё… — начал и Васька.

Поднялся Витька. Тоже хотел что-то сказать. Но Лапа не дал. Он уверенным жестом вытер варежкой нос и предложил деловито:

— Утекай отсюда, попугай конопатый. Перья выдергаю.

Витька, сохраняя достоинство, отряхнул снег. Смерил Лапу взглядом. Потом прищурился и сказал:

— Кабы не дела…

Он, не торопясь, поправил шапку, повернулся и солидной походкой двинулся домой. Алька держал зайца.

— Хороший какой зверь — оценил Валерка. — Только глаз подрисовать надо.

Алька молчал. Он почувствовал, что заревёт. Лапа долгим взглядом проводил Витьку и тоже заинтересовался зайцем:

— У меня такой же был. Пришлось в лес пустить.

— Кого? — сипло спросил удивлённый Алька и поднял на Лапу влажные глаза.

— Зайца. Он живой был. Маленький. Васька его чуть не сожрал. Это ж такая прорва…

Все помолчали, размышляя о наглом поведении Лапиного кота.

Потом, чтобы подлизаться к Лапе, Васька Клопик предложил:

— Надо этому зайцу брюхо зашить.

— Ниткой и иголкой, — поддержал Мишка. Валерка сказал:

— Это мы и без вас… Живодёры.

Они подошли к подъезду, и Валерка говорил, что не надо было на улицу зайца таскать.

— Играл бы дома.

— Он в ящике лежал, — тихо сказал Алька. — Я им и не играю… Почти.

— Всё равно, — серьёзно заметил Лапа. — Беречь-то надо. Может, ещё твоим детям пригодится. Тащи, Валерка, иголку.

Алька сел на крыльцо, и заяц лежал у него на коленях. Он опять раскинул толстые лапы с чёрными пятачками пальцев и смотрел вверх нарисованным глазом. Стеклянный глаз закрывало полуоторванное ухо. Алька покачал головой и что-то сказал. Сказал тихо-тихо, но с такой твёрдостью, что даже прикусил губу. Но слов Алькиных никто не слышал, кроме зайца. Может быть, только слышала ещё снеговиха. Она притворилась, что ей на всё это дело наплевать, но глаза у неё стали ещё краснее от досады.

Прибежал Валерка. Он широченно улыбался и показывал громадную четырёхгранную иглу. Такими иглами подшивают валенки.

— Порядок, — сказал Лапа. — А нитки принёс?

Алька снял варежки и взял зайца голыми руками. Надорванное ухо откинулось, и в блестящем заячьем глазу сверкнула живая искорка.

Плюшевая шкура согрелась от тёплых ладоней. И Альке вдруг показалось, что под ней толкнулось и начало чуть слышно сжиматься и разжиматься маленькое ватное сердце.

Алька тихо провёл ладонью по грустной заячьей морде и украдкой взглянул на друзей. Но они стояли к нему спиной. Валерка держал в вытянутой руке громадную иглу, а Лапа с кряхтеньем протаскивал через её ушко нитку, толстую, как шпагат.

Петли для волос заказать в Бердске: цены на Satom.ru

235 ₽

Резинка для волос «Махрушка» петельки крупные (набор 3 шт) 4 см, микс +7 (495) 36… показать

из Новосибирска в Бердск

Купить

916 ₽

Краб для волос «Глянец» утончённая петля, 9х3,5 см, чёрный (12 шт) +7 (495) 36… показать

из Новосибирска в Бердск

Купить

386 ₽

Резинка для волос «Махрушка»набор 12 шт) 4 см, петельки +7 (495) 36… показать

из Новосибирска в Бердск

Купить

141 ₽

Резинка для волос ‘Махрушка’набор 12 шт) 4 см, петельки 8 (800) 10… показать

из Екатеринбурга в Бердск

Купить

999 ₽

Фен для волос Braun 9902 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 000 ₽

Фен для волос Braun 9903 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

3 300 ₽

Набор для укладки волос Enzo EN-4108K +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 600 ₽

Фен для волос Bopai BP-5518 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 700 ₽

Фен для волос MAC MC-6627 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 900 ₽

Фен для волос MAC MC-6622 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

879 ₽

Фен для волос Cromoser CR-6216 5000W +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 490 ₽

Фен для волос Cronier CR-7733 белый +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 550 ₽

Фен для волос Cronier CR-6655 7000W +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

900 ₽

Фен для волос Braun 2200 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 600 ₽

Фен для волос MAC MC-6673 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 600 ₽

Фен для волос MAC MC-6674 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

2 500 ₽

Фен для волос MAC MC-6687 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 600 ₽

Фен для волос MAC MC-6672 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

2 000 ₽

Фен для волос MAC MC-6690 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

2 100 ₽

Фен для волос MAC MC-6689 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 700 ₽

Фен для волос MAC MC-6636 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

2 000 ₽

Фен для волос MAC MC-6690A +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 890 ₽

Фен для волос MAC MC-6688 +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

1 490 ₽

Фен для волос Cronier CR-7733 красный +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

650 ₽

Фен для волос T-vitek VT-1300 3000W +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

700 ₽

Фен для волос Braun BR-9100 3000W +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

899 ₽

Фен для волос Bopai BP-5510 с диффузором 4000 Вт +7 (499) 35… показать

из Москвы в Бердск

Купить

10 захватывающих фильмов о дороге

Дорога — то, что вдохновляет и поддерживает. Наполняет жизнь смыслом, удивляет, помогает переключиться. Она выручает и в моменты расставаний, и в дни невзгод, и в часы — якобы — спокойствия. Лечит, настраивает, меняет ориентиры. Учит коммуникации, красоте, силе и выносливости. Подсаживает на себя. Иногда к ней готовишься: планируешь путешествие, бюджет, места для посещения. Иногда решаешь отдать всё на волю случая: приеду — разберусь. А иногда и вовсе пускаешься в авантюру прям с места: без чёткого понимания, но с огромным желанием узнать что-то про мир, людей и себя. Эта подборка — 10 лент о тех, кто не испугался отправиться в путь. И о том, что из этого вышло.

Кадр из фильма «Как Витька Чеснок вёз Лёху Штыря в дом инвалидов»

1. «Небраска» (США, 2013)

Вуди (Брюс Дёрн) — пожилой чудик, любящий выпить. Странноватый, мечтающий, постепенно всё забывающий. Однажды он получает письмо, где указано, что он — счастливчик — выиграл миллион долларов. Отчаянный старик собирается пойти пешком в другой город, чтобы забрать то, что ему полагается. И повидать по дороге тех, с кем он так давно не говорил. Нежное чёрно-белое кино Александра Пэйна, мастера подобных картин, — щемяще-добрая история о мечте, помощи, страхе и одиночестве.

2. «Красный грузовик серого цвета» (Сербия, Германия, Словения, 2004)

Ратко (Срджан Тодорович) и Сюзанна (Александра Балмазович) едут в грузовике, заполненном контрабандным оружием, из Сербии в Словению (режиссёр — Срджан Колевич). Параллельно, как говорится, знакомясь с обычаями и традициями народов бывшей Югославии. Он только что вышел из тюрьмы — машина досталась ему почти случайно. Она — юная певица, что ищет любви и счастья. Юмор — балканский, ракия — в наличии.

3. «Арахисовый сокол» (США, 2019)

Яркая лента Тайлера Нильсона и Майкла Шварца, настраивающая на оптимистический лад. Тайлер (Шайа ЛаБаф) — бородатый парень — подворовывает крабов, ссылаясь на то, что оборудование принадлежало его брату; Зак (Зак Готтзаген) — парнишка с синдромом Дауна — мечтает стать звездой реслинга; Элеанор (Дакота Джонсон) — энергичная девушка — несколько лет помогает людям, трудясь социальным работником. По счастливой случайности три этих человека внезапно окажутся в одном пространстве. И каждый из них получит то, о чём много лет мечтал.

4. «Меня зовут Кхан» (Индия, ОАЭ, США, 2010)

Стереотипы — то, что ломает судьбы, отношения, договорённости. Их чудовищно сложно уничтожить, изменить, искоренить. Доказать, что у хороших и плохих людей нет национальности, что религия — не клеймо, что все жители одной страны, одного региона очень и очень разные. Ризван Кхан (Шахрух Кхан) живёт в Америке, переехав сюда из Индии. Любит, мечтает, работает. Спокойно гуляет по улицам, заходит в магазины, ничего не опасается. Всё меняется 11 сентября — с того дня мусульман начали бояться как огня. Удивительный трёхчасовой фильм Карана Джохара, получивший массу призов и номинаций, — бесстрашный поиск себя и своих в этом жестоком мире.

5. «Поездка» (Чехия, 1994)

Когда тебе немного за восемнадцать — невероятно хочется безумств. Хочется бежать куда-то без цели и огромных средств, хочется знакомиться, хочется быть живым здесь и сейчас. «Поездка» — история о двух приятелях, рассекающих Чехию на подержанном автомобиле. Попутно они разглядывают природу, болтают с местными жителями, влюбляются в хорошеньких девушек (режиссёр — Ян Сверак). Стильно, модно, молодёжно, позитивно и вообще.

6. «Страна надежды» (Норвегия, США, 2004)

Отец Бина — американский солдат, сам Бин (Дэмиен Нгуен) — вьетнамец (режиссёр — Ханс Петтер Муланд). На Родине парня и его младшего брата считают изгоями, грязью, врагами. А вот в США, в далёком краю демократии и прав… С этого и начинается долгий путь на другой конец света в поисках папы. Без денег, связей, карт и чёткого плана. С верой в попутчиков, новых знакомых и обычную людскую удачу.

7. «Невероятная жизнь Уолтера Митти» (Великобритания, США, 2013)

Ещё одна картина, подкидывающая оптимизма и позитива, которых всем нам сейчас так не хватает. «Невероятная…» — история о застенчивом мужчине, периодически проваливающемся в мир грёз, что работает в отделе иллюстраций. Журнал вот-вот перестанет существовать в бумажном формате, «уйдя» в интернет, на горизонте — выпуск итогового номера. Уолтер (Бен Стиллер, он же и режиссёр фильма) получает свежие негативы для обложки, но среди них нет одного-единственного кадра — кадра, который должен был стать лучшим в карьере автора, Шона О’Коннела. Самое время отправиться по следам неуловимого фотографа.

8. «О Шмидте» (США, 2002)

Своеобразный старший брат фильма «Небраска» (вновь режиссёр — Александр Пэйн) с Джеком Николсоном в главной роли, где есть место и рассуждениям о жизни, и пронзительным монологам, и комичным ситуациям. Пожилой мужчина отправляется в долгую дорогу после выхода на пенсию: чтобы расстроить свадьбу дочери с человеком, который ему не очень симпатичен, найти ответы на вопросы и недосказанности былого, прогуляться по волнам своей памяти.

9. «Как Витька Чеснок вёз Лёху Штыря в дом инвалидов» (Россия, 2017)

Детдомовец Витька (Евгений Ткачук) под руководством режиссёра Александра Ханта везёт своего папу Лёху (Алексей Серебряков) — сюрприз! — в дом инвалидов. На красном драндулете, весело и задорно. Параллельно выясняя отношения с батей, миром и собой. В этом фильме всё какое-то дурацкое: название, ситуации, сюжет. И при этом невероятно обаятельное в своей правдивости, простоте и лихой идиотичности.

10. «В диких условиях» (США, 2007)

Ни для кого не секрет, что путешествия меняют людей. Меняют что-то внутри, перестраивают датчики, увеличивают яркость восприятия. Есть поездки, своим примером вдохновляющие других, есть каникулы, что запоминаются надолго. А есть путешествия, которые делят твой (и не только твой) мир на до и после. Кристофер (Эмиль Хирш) — успешный парень, только что окончивший колледж (режиссёр — Шон Пенн). У него есть и богатые родители, и перспективы, и хорошие денежные накопления. Но он решает в один миг всё бросить и раздать, чтобы поехать автостопом на Аляску. Фильм основан на реальных событиях.

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:

«Давай после праздников?»: 10 фильмов, которые помогут выйти из спячки

10 фильмов для поднятия бодрости духа.

18 января

«Залипательное кино»: 10 фильмов, в которые можно повтыкать

10 фильмов для долгих новогодних каникул, где слова не так уж важны.

29 декабря 2020

«Районы, Балканы»: 10 фильмов стран бывшей Югославии, которые вы, вероятно, не видели

Не задор, а выяснение конфликтов между нациями, не радость, а общие проблемы, не праздники, а воспоминания о трагичной и недавней войне.

11 января

Читать «Не с пустыми руками. Анекдоты про подарки» — Сборник Сборник — Страница 1

Сборник

Не с пустыми руками… Анекдоты про подарки

* * *

– Возьмите назад ваш веер. Он сломался в первый же день.

– Я же говорил вам, что махать нужно не веером, а головой.

* * *

Приезжает американец под пасху в Москву в знакомую семью. Открывает дверь маленькая девочка. Американец:

– Хелло! А где папа?

– Папа в командировке.

– О, коммивояжер! А мама?

– Дом подметает.

– О, домохозяйка! А брат?

– А брат на кухне яйца красит.

– О, хиппи!

* * *

Пожилые туристы – супружеская пара – присели отдохнуть в римском кафе.

– Ног не чувствую, – вздохнула жена.

– Не беда, Джейн, – успокаивает ее муж. – Чем дольше ты будешь сидеть тут, тем древнее будет Колизей, когда мы наконец доплетемся до него.

* * *

Возвращается моряк большого рыболовецкого корабля из долгого похода.

Решил жене сделать подарок. Взял большого краба, высушил его, вылакировал и жене повез в подарок. Выходит он с корабля по трапу. Навстречу портовый грузчик. Грузчик:

– Мужик, а это что у тебя?

Моряк (с удовлетворением и мечтательной улыбкой от ожидаемой встречи с любимой женой):

– Это краб, сам ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене везу в подарок.

Выходит мужик из порта, садится в такси. Таксист у него и спрашивает:

– Мужик, а что это у тебя такое?

Моряк с тем же выражением лица и интонацией:

– Это краб, сам ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене везу в подарок.

Приезжает моряк в аэропорт. На таможне его спрашивает таможенник:

– Мужик, а что это у тебя?

Моряк с тем же выражением лица, но уже слегка раздраженно:

– Это краб, сам ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене везу в подарок.

Заходит моряк в самолет, там стюардесса его спрашивает:

– Мужчина, а что это у вас?

Моряк, уже с другим выражением лица, но спокойным голосом отвечает:

– Это краб, сам ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене везу в подарок.

Прилетает моряк в родной город, таксист его спрашивает:

– Мужик, а что это у тебя такое?

Моряк, слегка повышенным тоном, раздраженно и отрывисто:

– Это краб, сам ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене везу в подарок.

Приезжает моряк к подъезду, на лавочке сидят бабульки. Бабульки:

– Витек, это что у тебя такое?

Моряк, бешено вращая глазами и краснея, всеми силами стараясь не сорваться на крик:

– Это краб, сам ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене везу в подарок!

Поднимается моряк по лестнице. Навстречу сосед.

– Здорово Витек! А что это у тебя такое?

Моряк, красный как рак, из последних сил сдерживаясь, трясясь и сжимая кулаки:

– Это краб, сам ловил, сам сушил, сам лакировал. Вот жене везу в подарок!

Поднялся моряк на этаж, звонит в звонок. Жена, взглянув в глазок, открывает дверь (радостным голосом):

– Витенька, любимый, что это у тебя такое?

Тут моряк не выдерживает:

– МАН-ДА-ВОШКА!!!!!!!

* * *

Один коммивояжер возвращается из командировки и с ужасом слышит, как один из двух его попугаев повторяет сладким голосом: «Обними меня, дорогой, обними меня, дорогой». В приступе ревности коммивояжер задает трепку своей жене, а на следующий день уезжает по делам. Возвратившись, он не застает попугая-доносчика на месте. На вопрос, где он, жена отвечает, что, наверное, сгорел от любви. Тогда коммивояжер спрашивает у второго попугая, который остался в клетке:

– Скажи мне, что произошло?

– Я буду говорить, – отвечает попугай, – но только вдали от печки и в присутствии моего адвоката.

* * *

В магазине женщина выбирает метлу. Перебрала все, что были, потом заставила продавца принести еще со склада, снова перебрала все сначала. Через два часа продавец уже взмок. Наконец она выбрала:

– Вот эту.

– Мадам, вам завернуть или так полетите?

* * *

Было у одного фермера два сына-близнеца. Первый – в высшей степени оптимист, второй – законченный пессимист. Обеспокоенный пессимизмом одного из сыновей, фермер идет за советом к психологу. Тот ему советует сделать им на день рождения подарки, поместив их в два сарая. В первый сарай нужно поместить новый мотоцикл «Кавасаки», а во второй – кучу навоза. Естественно, мотоцикл предназначается для пессимиста, а куча – для оптимиста.

В день рождения сыновей отец им говорит:

– А я для вас приготовил подарки, твой лежит в сарае, который слева, а твой – в сарае справа.

Пессимист идет в сарай слева, выводит оттуда мотоцикл и начинает сокрушаться:

– Ну вот, а что будет, если его угонят? Я этого не переживу. А если я в аварию на нем попаду? Я же разобьюсь насмерть.

Оптимист идет в сарай справа. Час его нет, два… Наконец отец решил пойти посмотреть, в чем дело. Зайдя в сарай, он увидел, что его сын, весь перепачканный в навозе, копается в куче. Увидев отца, сын говорит:

– Я уверен, что под этой кучей спрятан подарок!

* * *

Хенриксен и Мортенсен встретились за столиком своего излюбленного кафе. После первой рюмки Хенриксен сказал:

– Дома – сплошные скандалы. Ситуация настолько сложная, что единственный выход, с моей точки зрения, – это вступление в Иностранный легион. Но представляешь, старина, никак не могу уговорить жену, чтобы она в него завербовалась…

* * *

Новый год в детском доме инвалидов. Дед Мороз забегает в палату кидает мешок с подарками. Детишки, кто без ручек, кто без ножек попрыгали с кроваток, разбирают подарки. Один маленький мальчик, без ручек, без ножек лежит на кроватке, кричит:

– Ребята, оставьте мне подарок.

Ему:

– Да пошел ты!

Он опять:

– Ну, ребята, ну оставьте подарок.

Ему опять:

– Да пошел ты!

Спрыгнул он с кроватки, как червячок дополз, схватил зубами подарок, отполз в самый дальний угол. Развернул подарок зубами:

– Б…ДЬ! ОПЯТЬ СКАКАЛКА!!!

* * *

Вернулся мужик из длительной африканской командировки. Приходит в гости к друзьям, с маленькой обезьянкой на плече, рассказать о впечатлениях. Начинает рассказывать, как было трудно, его перебивают:

– А с бабами-то там как?

– Да понимаете, незнакомая пища, климат…

– А с бабами как?

– Работали с утра до вечера, надо было вовремя сдать объект…

– Да понятно, ты скажи, как там с бабами было?

Обезьянка трогает мужика за плечо:

– Пап, а пап, ну расскажи ты им.

* * *

Дама высокого роста в отделе тканей, выбрав материал в клеточку, обратилась к продавцу:

– Молодой человек, отмерьте мне на юбку 40 см.

Продавец внимательно посмотрел на даму и спросил:

– Сколько вы сказали?

– Вас смущает количество?

– Да, обычно женщины берут 70–75 см.

– А я хочу, чтобы были видны мои чашечки…

– Теперь мне понятно… и я посоветую вам взять 20 см, чтоб был виден весь сервиз!

* * *

Американский бизнесмен говорит приятелю:

– Я купил своей жене в подарок на день рождения очень красивое ожерелье.

– Но ведь она говорила, насколько я помню, что хотела бы получить новую автомашину.

– А где вы видели, чтобы продавали фальшивые машины?

* * *

Двое друзей, итальянский и еврейский мальчик, достигли совершеннолетия в один день. Итальянскому мальчику отец подарил пистолет. Еврейский мальчик получил в подарок красивые золотые часы. На следующий день в школе два друга демонстрируют, что они получили в подарок. Поскольку каждому больше нравится подарок, который получил приятель, они обмениваются своими подарками.

Вечером, когда итальянский мальчик сидит дома, отец замечает у него часы. «Где ты это взял?» – спрашивает он. Мальчик объясняет, что они с другом обменялись подарками. Его отец чуть не взрывается: «Ты что? Глупый? Что с тобой такое! Однажды ты, наверное, женишься. И потом однажды ты, наверное, придешь домой и найдешь свою жену в кровати с другим мужиком. И что ты будешь делать? Посмотришь на часы и скажешь: «Вы тут еще долго?»

Показатели VITEK 2, E-test, дисковой диффузии Кирби-Бауэра и модифицированной дисковой диффузии Кирби-Бауэра по сравнению с эталонным микроразбавлением бульона для тестирования чувствительности к тигециклину устойчивых к карбапенемам K. pneumoniae и A. baumannii в многоцентровом исследовании в Китае

Тигециклин — альтернативный антибиотик для лечения устойчивых к карбапенемам грамотрицательных бактериальных инфекций. Однако дисковая диффузия и автоматическое тестирование часто показывают ложно-промежуточные или ложно-устойчивые результаты в отношении чувствительности к тигециклину, что вводит в заблуждение клиническую антимикробную терапию.Микроразбавление бульона (BMD) является эталонным методом для определения чувствительности к тигециклину, но его выполнение в клинических лабораториях требует больших затрат труда и времени. Поэтому срочно нужен простой и точный метод. Мы оценили эффективность VITEK 2, E-test, дисковой диффузии Кирби-Бауэра (KB) и модифицированной дисковой диффузии KB (mKB) в сравнении с BMD при тестировании чувствительности к тигециклину 372 штаммов устойчивых к карбапенемам Klebsiella pneumoniae (CRKP) и 346 штаммов. устойчивых к карбапенемам Acinetobacter baumannii (CRAB).BMD подтвердила, что 96,8% штаммов CRKP и 91% штаммов CRAB были чувствительны к тигециклину. E-test, VITEK 2, KB и mKB дали категориальное согласие 96,7 / 59,3%, 69,9 / 54,3%, 78,5 / 87,3% и 96,5 / 91% для CRKP / CRAB, соответственно. Ни для CRKP, ни для CRAB каким-либо методом не было обнаружено серьезных ошибок. Никаких серьезных ошибок для CRKP или CRAB методом mKB обнаружено не было. Метод mKB, усиленный R-буфером, является простым, точным и недорогим для клинических лабораторий для тестирования чувствительности изолятов CRKP и CRAB к тигециклину.

Ключевые слова: Тестирование на чувствительность к противомикробным препаратам; Устойчивые к карбапенемам Acinetobacter baumannii; Устойчивые к карбапенемам Klebsiella pneumoniae; Категорическое согласие; Основная ошибка; Модифицированная дисковая диффузия; Тигециклин; Очень серьезная ошибка.

Сочетание VITEK® 2 со скринингом на разведении колистинового агара помогает своевременно сообщать о чувствительности к колистину

https://doi.org/10.1016/j.cmi.2018.09.014Получить права и контент

Реферат

Цели

Рост устойчивости к карбапенемам среди грамотрицательных бактерий возобновил интерес к колистину. Недавно рабочая группа EUCAST-CLSI по контрольным точкам полимиксина заявила, что микроразведение бульона (BMD) является единственным допустимым методом тестирования чувствительности к колистину. МПК нелегко включить в рутинную работу клинических лабораторий, и обычно этот тест включается серийно, что приводит к задержке отчетов о чувствительности.Мы протестировали стратегию комбинирования VITEK ® 2 с скрининговым планшетом с разведением 2 мкг / мл колистинового агара (VITEK ® 2 / AD), чтобы улучшить характеристики и время для отчета о чувствительности к колистину.

Методы

Чувствительность к колистину для 364 клинических изолятов была определена с помощью VITEK ® 2 / AD и сравнена с эталонным стандартом BMD в соответствии с ISO 20776-1: 2007 и рекомендациями CLSI. Использовалась граница чувствительности к колистину EUCAST ≤2 мкг / мл. Escherichia coli NCTC 13846 служил штаммом контроля качества. Согласие, очень большая ошибка (VME) и частота серьезных ошибок были определены с использованием ISO 20776-2: 2007.

Результаты

Частота УМЭ для одного только VITEK ® 2 составляла 30,6% (15/49, 95% ДИ 18,3–45,4%) и была снижена до 10,2% (5/49, 95% ДИ 3,4–22,2%). ) с помощью комбинированного тестирования VITEK ® 2 / AD. Комбинированное тестирование имело категориальное согласие с МПК 97% (354/364, 95% ДИ 95,0–98,7%) и степенью основной ошибки (ME) 1.6% (5/315, 95% ДИ 0,5–3,7%). Используя комбинированное тестирование, даже против сложных штаммов, можно было зарегистрировать 349 (95,8%, 95% ДИ 93,3–97,7%) результатов чувствительности к колистину, и только 15 изолятов потребовали дальнейшего анализа по МПК.

Обсуждение

Наш метод прост в применении и позволяет быстро определять чувствительность к колистину.

Ключевые слова

Разведение агара

Микроразведение бульона

Устойчивость к карбапенему

Чувствительность к колистину

Комбинированный метод

VITEK 2

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

Опубликовано Elsevier Ltd.

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Эффективность VITEK 2, E-test, дисковой диффузии Кирби-Бауэра и модифицированной дисковой диффузии Кирби-Бауэра по сравнению с эталонным микроразбавлением бульона для проверки чувствительности к тигециклину карбапенемов K. pneumoniae и A. baumannii в многоцентровом исследовании в Китае

ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ

Показатели VITEK 2, E-test, дисковой диффузии Кирби-Бауэра,

и модифицированной дисковой диффузии Кирби-Бауэра по сравнению с эталоном

микроразбавление бульона для тестирования чувствительности к тигециклину

карбапенем-резистентных K.pneumoniae и A. baumannii

в многоцентровом исследовании в Китае

Dandan Yin

1,2

и Yan Guo

1,2

и Min Li

3

и Wenjuan Wu

4

5

и Инь Лю

6

и Фэн Чен

6

и Юсин Ни

7

и Цзинъён Сунь

7

и

o 9000 и

9000 Zhang 9000 и 9000 3 Hu

1,2

Поступило: 6 августа 2020 г. / Принято: 20 ноября 2020 г.

# Springer-Verlag GmbH Германия, часть Springer Nature 2021

Abstract

Тигециклин — альтернативный антибиотик для борьбы с устойчивостью к карбапенемам Gram- отрицательные бактериальные инфекции.Тем не менее, диффузионное и автоматическое тестирование диска

часто показывает ложно-промежуточные или ложно-устойчивые результаты в отношении чувствительности к тигециклину, вводя в заблуждение клиническую антимикробную терапию

. Микроразбавление бульона (BMD) является эталонным методом для определения чувствительности к тигециклину, но его выполнение в клинических лабораториях требует больших затрат труда и времени. Поэтому срочно нужен простой и точный метод

. Мы оценили эффективность VITEK 2, E-test, дисковой диффузии Кирби-Бауэра (KB) и модифицированной дисковой диффузии KB

(mKB) в сравнении с BMD при тестировании чувствительности к тигециклину 372 штаммов устойчивых к карбапенемам Klebsiella pneumoniae (CRKP)

и 346 штаммов устойчивой к карбапенемам Acinetobacter baumannii (CRAB).BMD подтвердила, что 96,8% штаммов CRKP и 91% штаммов

CRAB были чувствительны к тигециклину. E-test, VITEK 2, KB и mKB дали категориальное согласие 96,7 / 59,3%,

69,9 / 54,3%, 78,5 / 87,3% и 96,5% / 91% для CRKP / CRAB, соответственно. Ни для CRKP, ни для

CRAB каким-либо методом не было обнаружено очень серьезных ошибок. Никаких серьезных ошибок для CRKP или CRAB методом mKB обнаружено не было. Метод mKB, усиленный буфером R-

, является простым, точным и недорогим для клинических лабораторий для тестирования чувствительности изолятов CRKP и CRAB к тигециклину

.

Ключевые слова Тигециклин. Тестирование на чувствительность к противомикробным препаратам. Модифицированная дисковая диффузия. Устойчивые к карбапенемам Klebsiella

pneumoniae. Устойчивые к карбапенемам Acinetobacter baumannii.

* Фупин Ху

[email protected]

1

Институт антибиотиков, больница Хуашань, Университет Фудань, 12 М.

Wulumuqi Rd., Шанхай 200040, Китайская Народная Республика

2

Ключевая лаборатория клинической фармакологии антибиотиков, Министерство

Здравоохранение, Шанхай, Китай

3

Больница Ренджи, Школа медицины, Шанхайский университет Цзяотун,

Шанхай, Китай

4

Шанхайская Восточная больница, Университет Тунцзи, Шанхай, Китай

5

Шестая народная больница при Шанхайском университете Цзяо Тонг,

Шанхай, Китай

6

Больница Синьхуа, Школа медицины, Шанхай Цзяо Tong

University, Шанхай, Китай

7

Больница Жуйцзинь, Медицинский факультет Шанхайского университета Цзяотун,

Шанхай, Китай

8

Детская больница Шанхая, Шанхайский университет Цзяотун,

Шанхай, Китай

9

Больница Хуадонг, Университет Фудань, Шанхай, Китай

https: // doi.org / 10.1007 / s10096-020-04123-z

/ Опубликовано в Интернете: 7 января 2021 г.

Европейский журнал клинической микробиологии и инфекционных заболеваний (2021 г.) 40: 1149–1154

Содержание предоставлено Springer Nature, применяются условия использования . Права защищены.

Оценка тестов на ростки | Лаборатории Чарльз-Ривер.

Неудивительно, что фармацевтические препараты, медицинские устройства и другие регулируемые биомедицинские продукты должны производиться в стерильных условиях. Мало кто из нас когда-либо сделал бы прививку или распечатал бы флакон с раствором для контакта, если бы подумал, что он заражен, поэтому ответственные производители выделяют значительные ресурсы, чтобы бактерии и грибки не попали в цепочку поставок.

Те же опасения распространяются и на миллионы моделей грызунов, усердно работающих на передовых рубежах науки. Поскольку непрошеные патогены могут скомпрометировать результаты исследования и повлиять на здоровье и благополучие исследуемого животного, лабораториям необходимо обеспечить надлежащую санитарную обработку и дезинфекцию своих помещений. Персонал лаборатории также должен следить за эффективностью своего контроля качества, регулярно проверяя на наличие бактерий и грибков. Обычно это делается путем первого подсчета колоний микробов, которые были собраны на пластинах RODAC (повторное обнаружение и подсчет микроорганизмов), прижатых к стенам, полам и потолкам, где содержатся подопытные животные.Затем планшеты инкубируют при 35 градусах Цельсия в течение 1-2 дней и идентифицируют с использованием фенотипических систем, таких как популярный VITEK® 2 Compact, продаваемый французской диагностической компанией bioMérieux.

VITEK® 2, автоматизированная система идентификации, предназначена для оценки микролунок тонких пластиковых идентификационных карт размером со стандартную игральную карту. Сначала необходимо выполнить реакцию окрашивания по Граму и выполнить микроскопическое исследование, чтобы определить морфологию клеток бактерий, которая определяет, какую карту VITEK® 2 следует использовать.Каждая карта включает от 30 до 64 лунок, содержащих различные обезвоженные биохимические субстраты — химические соединения, запускающие ферментативные реакции, — которые используются в качестве своего рода счетчика Гейгера или кода Морзе при идентификации микроорганизмов.

Система VITEK® 2, которая со временем модернизировалась, хорошо служила лабораториям на животных, но, как известно любому специалисту по диагностике животных, система несовершенна. Это особенно верно для Pasteurella pneumotropica, a Грамотрицательные бактерии, переносимые преимущественно крысами и мышами, что часто встречается в лабораториях на животных.Существует два различных подтипа P. pneumotropica , которые циркулируют у грызунов, но поскольку этот вид бактерий вступает в реакцию лишь с некоторыми субстратами, содержащимися на картах VITEK® 2, вы не можете точно идентифицировать биотипы. Таким образом, становится необходимым проверить два штамма, свойственные мышам, известные как Heyl и Jawetz, с помощью технологии полимеразной цепной реакции (ПЦР). Bordetella bronchiseptica, другая грамотрицательная бактерия, обнаруженная у мелких млекопитающих и тесно связанная с источником коклюша, и Corynebacterium bovis , грамположительный патоген, распространенный в некоторых колониях голых мышей, также представляют проблемы для VITEK. ® 2.

Фитнес-тест
Итак, Отдел диагностических услуг для животных (RADS) в Чарльз-Ривер, который всегда пытается улучшить эпиднадзор за болезнями, решил посмотреть, как VITEK® 2 выдержит — считайте это нашим олимпийским соревнованием — против альтернативная платформа для идентификации микробов, называемая MALDI-TOF MS, которую подразделение CR по тестированию эндотоксинов Accugenix из Делавэра предлагает множеству производителей биофармацевтических, нутрицевтических и медицинских устройств по всему миру, но которая обычно не применяется в условиях лабораторий на животных.В частности, команда RADS хотела увидеть, насколько хорошо служба Accugenix, называемая AccuPRO-ID®, распознает изоляты, с которыми борется VITEK® 2. AccuPRO-ID — это многофазный подход к идентификации бактерий, который включает MALDI-TOF, который затем поддерживается службой секвенирования рДНК Accugenix 16S.

Это внутреннее упражнение имеет большой смысл. Подразделение RADS — крупнейшая лаборатория такого рода в мире и ведущая справочная лаборатория в животноводстве. Ежегодно он выполняет миллионы (правильно, миллионы!) Анализов здоровья на нескольких видах лабораторных животных не только для Charles River — крупнейшего клиента RADS, — но и для разнообразной глобальной клиентуры из фармацевтического, биотехнологического и государственного секторов.Тем временем компания Accugenix провела около 200 000 бактериальных и грибковых идентификаций для своих клиентов по всему миру в 2013 году. Кроме того, миссия команды НИОКР состоит в том, чтобы постоянно совершенствовать свои собственные методы, а также искать инновационные методы тестирования, чтобы лаборатория оставалась на переднем крае.

Итак, как RADS отвечает на этот вопрос? Система Accugenix MALDI-TOF MS (для матричной лазерной десорбции / ионизации – времяпролетной масс-спектрометрии) использует муравьиную кислоту, матрицу и лазер для разделения бактериальных образцов и испарения ионизированных белков.Затем спектры неизвестного белка сравниваются с библиотекой спектров известных организмов для идентификации. Виды, которые MALDI-TOF MS не распознает, секвенируются для клиентов без дополнительных затрат. Мы решили обратить внимание на сервис Accugenix AccuPRO-ID, потому что, по крайней мере, в промышленных условиях он может правильно идентифицировать бактерии примерно в 98% случаев. Напротив, VITEK® 2 неправильно определяет бактерии примерно в трети случаев.

Цели исследования
Исследование преследовало две основные цели.Во-первых, мы посмотрим, сможем ли мы достичь аналогичных результатов с помощью службы Accugenix AccuPRO-ID, что и с VITEK® 2. Мы также хотели оценить любые вариации в полевых изолятах в зависимости от того, какая система используется. Итак, чтобы ответить на эти вопросы, семена партий B. bronchiseptica, C. bovis и P. pneumotropica были засеяны на агаризованную среду и отдельные колонии, отобранные для идентификации и пересева VITEK® 2. Один планшет и один препарат высушенного этанола для каждого образца также были отправлены в Accugenix.Исследование включает сравнение ПЦР, проводимое в лаборатории RADS по MDX, чтобы можно было оценить все три методологии.

Итак, какая стратегия возьмет золото? Хотя классификации бактерий с помощью MALDI-TOF MS более точны, чем с помощью VITEK® 2 — благо для исследовательских лабораторий на животных, — переход на систему Accugenix в определенных ситуациях может стоить дороже. Лучший способ определить это — сравнить истинные затраты — как постоянные, так и переменные — вместе с затратами на дополнительные тесты и количество раз, когда вы должны повторить тесты в системе VITEK® 2, когда идентификация не может быть произведена или была сомнительный.

Исследование началось на этой неделе, поэтому мы скоро получим ответы. Следите за результатами!

Распространенность различных генов карбапенемаз среди устойчивых к карбапенемам изолятов крови Acinetobacter baumannii на Тайване | Устойчивость к противомикробным препаратам и инфекционный контроль

Дизайн исследования

Критерии включения были перечислены следующим образом: все тестируемые штаммы были выделены от инфицированных пациентов из 4 медицинских центров высшего уровня на Тайване, рандомизированы для сбора до 100 клонов комплекса ACB с имипенемом или меропенемом. МИК не менее 8 мг / л в каждом медицинском центре третичного уровня с января 2009 года по декабрь 2013 года.Критерии исключения заключались в том, что только первый эпизод был зарегистрирован у пациентов с ≥2 положительными культурами крови, другие изоляты крови были исключены. Мы собрали изоляты крови комплекса ACB с помощью системы Vitek 2, и дальнейшая видовая идентификация комплекса ACB была подтверждена анализом гена субъединицы РНК-полимеразы ( rpo B). Распространенность различных генов карбапенемаз среди CRAB определяли с помощью стандартной ПЦР и секвенирования. МИК имипенема и меропенема тестировали на всех изолятах крови CRAB.Кроме того, МИК тигециклина, цефтазидима, цефепима, амикацина, ампициллина / сульбактама, пиперациллина / тазобактама и колистина тестировались только для гена высокой устойчивости bla OXA-24 . Чувствительность к противомикробным препаратам была протестирована с использованием системы Vitek-2 и интерпретирована в соответствии с руководящими принципами Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI), за исключением МИК тигециклина, которые интерпретировались в соответствии с контрольными точками Европейского комитета по тестированию чувствительности к противомикробным препаратам (EUCAST) для Enterobacteriaceae виды(МИК> 2 мг / л считалась устойчивой). Гель-электрофорез в импульсном поле был использован для анализа пульсотипов гена с высокой устойчивостью bla OXA-24 -подобных.

Ожидалось, что каждый медицинский центр соберет 100 комплексных изолятов крови ACB. Больница MacKay Memorial Hospital — это медицинский центр на 2200 коек на севере Тайваня. Главный госпиталь для ветеранов Тайбэя — это медицинский центр на 3000 коек на севере Тайваня. Больница общего профиля Tri-Service — это медицинский центр на 1800 коек на севере Тайваня.Христианская больница Чанхуа — это медицинский центр на 1500 коек в центральном Тайване. Эти четыре медицинских центра предоставляют как первичную, так и третичную помощь, включая лечение рака, интенсивную терапию и трансплантацию органов. Это ведущие больницы Тайваня.

Коллекция бактериальных изолятов

Все протестированные штаммы были изолированы от инфицированных пациентов. Всего с января 2009 г. по декабрь 2013 г. в 4 медицинских центрах высшего уровня на Тайване было собрано 357 изолятов крови комплекса ACB с МПК имипенема или меропенема не менее 8 мг / л.Всего в 4 медицинских центрах было собрано 357 изолятов крови, не содержащих дубликатов комплекса ACB. Изоляты крови комплекса ACB хранили при -70 ° C в триптическом соевом бульоне (BD, MD, USA) с добавлением 20% глицерина ( v / v). Замораживание при -70 ° C с высоким процентным содержанием глицерина использовалось в качестве криозащитных агентов. Все пациенты были деидентифицированы локально и перекодированы. Затем изоляты крови были доставлены в исследовательскую лабораторию больницы MacKay Memorial для дальнейшего изучения. Этот протокол исследования (14MMHIS125) был рассмотрен и одобрен экспертным советом больницы MacKay Memorial, Тайбэй, Тайвань.

Идентификация видов

Чашки инкубировали в аэробных условиях при 36 ° C и оценивали рост через 24 и 48 часов. Подозрительные колонии культивировали на кровяном агаре и идентифицировали на уровне видов с помощью автоматизированной системы Vitek MS (bioMerieux). Чувствительность к противомикробным препаратам проверяли с помощью Vitek-2 (карточка AST-N196 и / или N248). Все изоляты хранили при -70 ° C для анализа генетического родства. Идентификация геновидов комплекса ACB была подтверждена анализом гена субъединицы β РНК-полимеразы ( rpo B) в соответствии с протоколом La Scola et al.[6].

Тестирование чувствительности к противомикробным препаратам

Чувствительность к противомикробным препаратам исследовали с помощью системы Витек-2. МИК имипенема и меропенема тестировали на всех изолятах крови CRAB. Однако МИК тигециклина, цефтазидима, цефепима, амикацина, ампициллина / сульбактама, пиперациллина / тазобактама и колистина тестировались только для гена высокой устойчивости bla OXA-24 . МИК тестируемых антибиотиков интерпретировали в соответствии с рекомендациями CLSI, но МИК тайгециклина интерпретировали в соответствии с контрольными точками EUCAST для Enterobacteriaceae spp.(МИК> 2 мг / л считалась устойчивой). Staphylococcus aureus ATCC 29213, Escherichia coli ATCC25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 были измерены для контроля качества. Все результаты были в пределах диапазона контроля качества.

Полимеразная цепная реакция и секвенирование

Изоляты крови комплекса ACB были проверены на следующие гены карбапенемаз с использованием стандартной ПЦР и секвенирования: bla IMP, bla VIM , bla NDM NDM bla SPM , bla GIM , bla SIM , bla KPC , bla GES , bla a-23271 OX OXA-24 -like, bla OXA-51 -like, bla OXA-58 -like, bla OXA-143 -like, bla OXA -like 235 .Последовательности праймеров показаны в таблице 1 [7,8,9,10,11,12]. Деионизированная дистиллированная вода использовалась в качестве отрицательного контроля. Изоляты, последовательности которых были ранее подтверждены, использовали в качестве положительного контроля. Была проведена мультиплексная ПЦР. Отдельная группа из 2 ~ 10 грунтовок (например, bla IMP , bla VIM , bla NDM , bla SP GIM , bla SIM , bla KPC , bla GES , bla OX 9027 -1

OXA-24-like , bla OXA-51-like , bla OXA-58-like , bla OXA-143 bla2 и bla2 OXA-235-like ) каждый раз использовали для тестирования мультиплексной ПЦР.Условиями ПЦР были один цикл при 95 ° C в течение 10 минут, затем 40 циклов при 94 ° C в течение 1 минуты, 52 ° C в течение 1 минуты, 72 ° C в течение 2 минут и, наконец, один цикл при 72 ° C в течение 10 минут. мин с последующим охлаждением до 4 ° C. Образец амплифицированной ДНК подвергали электрофорезу в агарозном геле и окрашивали бромидом этидия для оценки чистоты и размера продуктов мультиплексной ПЦР. Продукты ПЦР визуализировали электрофорезом в агарозном геле, окрашенном бромидом этидия, с последующим сшиванием в УФ-свете. Ампликоны ПЦР очищали для секвенирования ДНК с использованием реагента ExoProStar ™ (GE Healthcare, Великобритания) в соответствии с инструкциями производителя и инкубировали при 37 ° C в течение 30 минут с последующей инкубацией при 80 ° C в течение 15 минут для инактивации ферментов.Обработанные ферментом продукты ПЦР секвенировали с использованием набора BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA) в соответствии с инструкциями, предоставленными производителем. Продукты ПЦР очищали с помощью гель-фильтрации с Sephadex G-50 (GE Healthcare, UK) с использованием спин-колонок в 96-луночном фильтрующем планшете MultiScreen ™ Filtration System (Millipore) для удаления невключенных терминаторов красителя. Окончательное считывание последовательности ДНК выполняли в анализаторе секвенатора ДНК ABI Prism 377 (Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния, США).Поиск сходства последовательностей выполнялся с помощью основного инструмента поиска локального выравнивания (BLAST, http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).

Таблица 1 Олигонуклеотидные праймеры, использованные в этом исследовании

Гель-электрофорез в импульсном поле

Одиннадцать изолятов с bla OXA-24 -подобных генов среди 357 комплексных изолятов крови ACB были типированы с помощью гель-электрофореза в импульсном поле после переваривания. интактной геномной ДНК с Apa I (New England Biolabs) [13].Фрагменты ДНК разделяли на 1% ( мас. / Об. ) гелях агарозы SeaKem Gold в 0,5% буфере трис-борат-этилендиаминтетрауксусной кислоты с использованием устройства Mapper для гомогенного электрического поля (CHEF) с фиксированным контуром (Bio-Rad , Геркулес, Калифорния, США) при потенциале 6 В / см в импульсном режиме от 5 до 20 с в течение 19 часов при 14 ° C [13]. Гели окрашивали бромидом этидия и фотографировали в ультрафиолетовом свете. Профили рестрикции Apa I сначала сравнивали при визуальном осмотре, и изоляты считались близкородственными, если они имели различия менее чем в трех полосах [14].Также был проведен компьютерный анализ с использованием программного обеспечения BioNumerics (Applied Maths, Sint-Martens-Latem, Бельгия). Кластерный анализ проводился невзвешенным парно-групповым методом с математическим усреднением. Сходство ДНК рассчитывали с использованием коэффициента Дайса на основе полос с настройкой допуска 1,0% и настройкой оптимизации 1,0% для всего профиля. Изоляты считались находящимися в одном кластере, если коэффициент сходства превышал 87% [13].

Генетическое разнообразие устойчивых к имипенемам инфекций Acinetobacter baumannii в отделении интенсивной терапии

Введение .Устойчивый к имипенему Acinetobacter baumannii (IRAB) представляет собой серьезную клиническую угрозу. Распространение в областях интенсивной терапии требует эффективных мер, включая инструменты генотипирования, для изучения клональности этих штаммов и отслеживания их происхождения. Основная цель этого исследования — оценить генетическое родство между изолятами IRAB в наших отделениях интенсивной терапии (ОИТ), которые подвержены особому риску вспышек. Методы . Нерепликативные штаммы IRAB собирали серийно в течение 3 лет (январь 2016 г. — декабрь 2018 г.) у пациентов, поступивших в отделение интенсивной терапии.Изоляты были фенотипически идентифицированы с помощью системы, основанной на лазерной десорбции / ионизации с использованием матрицы и времени пролета (MALDI-TOF-) (VITEK MS), и их чувствительность была протестирована с помощью системы VITEK 2 на основе фенотипа. Молекулярный фингерпринт выполняли методом повторяющегося межгенного консенсуса энтеробактерий (ERIC-PCR) с последующей иерархической кластеризацией. Паттерны анализировали с помощью программного обеспечения пакета BioNumerics версии 7.6.3 (Applied Maths, Бельгия). Результатов . В общей сложности восемьдесят IRAB были выделены из 31 очага колонизации и 59 очагов инфекции у пациентов, поступивших в отделение интенсивной терапии.Шестьдесят два образца имели респираторное происхождение (77,5%). Сгенерированная дендрограмма выявила четкие закономерности для большинства (95%) штаммов. Меропенем сохранял активность против 43,8% устойчивых к имипенему A. baumannii . Заключение . Меропенем может быть терапевтическим вариантом для устойчивых к имипенему A. baumannii . Образцы полос предполагают, что несколько штаммов IRAB циркулируют в отделениях интенсивной терапии учреждения. Необходимо оценить факторы, приводящие к такому разнообразию, включая потребление противомикробных препаратов.

1. Введение

Acinetobacter baumannii — это сложный нозокомиальный патоген, который адаптировался к условиям больницы и имеет особую связь с отделениями интенсивной терапии [1]. Глобальное исследование, охватывающее семьдесят пять стран на пяти континентах, определило этот патоген как пятый проблемный организм, вызывающий внутрибольничные вспышки и связанные со здоровьем инфекции в условиях интенсивной терапии [2]. Инфекции штаммами с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ), определяемыми как нечувствительность к агенту или более чем к трем классам противомикробных препаратов, а также штаммами с широкой лекарственной устойчивостью (ШЛУ) A.baumannii и определяется как нечувствительность хотя бы к одному агенту из всех классов противомикробных препаратов, кроме двух или меньшего, все чаще регистрируется в различных частях мира [3–5]. Недавний систематический обзор, в котором исследовалась множественная резистентность в организме за десять лет, пришел к выводу, что ожидается эра постантибиотиков для A. baumannii [6]. Поскольку карбапенемы считаются последним вариантом лечения инвазивных инфекций A. baumannii , появление и распространение устойчивых к карбапенемам штаммов Acinetobacter baumannii (CRAB) представляет собой серьезную клиническую угрозу [6–8].Вспышки CRAB часто регистрируются в медицинских учреждениях, особенно в отделениях интенсивной терапии [9]. Эти вспышки могут быть вызваны клональным распространением или распространением генетически неродственных штаммов. Клональность в таком случае может быть исследована с помощью инструментов молекулярного типирования, из которых несколько методов были использованы для типирования организма в различных условиях [10].

Схемы генотипирования на основе ПЦР — это быстрые, недорогие и удобные в использовании инструменты для типирования A. baumannii в случае вспышек.Праймеры при снятии отпечатков пальцев с помощью ПЦР с повторяющимися элементами определяют повторяющиеся последовательности ДНК в геноме организма. Примером может служить повторяющаяся межгенная консенсусная последовательность энтеробактерий (ERIC) для генотипирования бактериальных штаммов. Эти методы позволяют создавать инструменты распознавания отпечатков пальцев ДНК, которые доказали свою эффективность при обнаружении генетически родственных клональных линий [11]. Исследования, которые выявили генетическое родство КРАБ в регионах интенсивной терапии в странах Ближнего Востока, ограничены [12–15].Это исследование было проведено для оценки генетического родства когорты CRAB, выделенной в крупной академической больнице в Восточной Саудовской Аравии, с использованием иерархической кластеризации на основе ERIC-PCR. Это может помочь установить нозокомиальные кластеры и связать потенциально родственные штаммы из общих источников среди пациентов, чтобы лучше понять структуру популяции A. baumannii .

2. Материалы и методы
2.1. Условия исследования и изоляты

Все нерепликативные штаммы A.baumannii , выделенный из клинических образцов, принадлежащих пациентам всех возрастов, был госпитализирован в отделения интенсивной терапии Университета им. Короля Фахда в период с января 2016 г. по декабрь 2018 г. Использовался первый образец пациента, а также образцы наблюдения пациентов при поступлении или передачи были исключены. Образцы инокулировали кровью, и чашки с агаром MacConkey (Saudi Prepared Media Laboratory Company (SPML), Саудовская Аравия) инкубировали в аэробных условиях в течение ночи при 35 ° C. Подозреваемые колонии, основанные на морфологии колоний и положительных по каталазе и отрицательных реакциях на оксидазу, были дополнительно протестированы для подтверждения их идентичности.Кроме того, отбор проб окружающей среды был предпринят на различных поверхностях в отделении интенсивной терапии, как описано ранее, включая поверхности с высокой степенью касания (перила, над прикроватными столиками, инфузионные насосы, клавиатуры и тележки для аварийных отключений) [16]. Каждый мазок из окружающей среды инокулировали в 5 мл бульона для инфузии мозг-сердце (BHI) (SPML, Саудовская Аравия) и перемешивали. После инкубации в течение ночи при 35 ° C рост субкультивировали на чашку с агаром MacConkey (SPML, Саудовская Аравия).

2.2. Фенотипические методы

Идентификация A.baumannii было выполнено в диагностической микробиологической лаборатории с использованием VITEK MS (bioMérieux, США) на основе технологии матричной лазерной десорбции / ионизации по времени пролета (MALDI-TOF), а тестирование на чувствительность к противомикробным препаратам проводилось с помощью системы VITEK 2 ( bioMérieux, США). Тесты E (AB BIODISK, Швеция) использовались для измерения минимальных ингибирующих концентраций (МИК) карбапенемов и тигециклина в соответствии с рекомендациями Института клинических лабораторных стандартов (CLSI 2018) для всех противомикробных препаратов, кроме тигециклина, где МИК интерпретировались в соответствии с U.S. Контрольные точки FDA [17]. Изоляты, которые были устойчивы к карбапенемам (CRAB), определяемые как устойчивость к любому карбапенему, были дополнительно изучены. Замороженные исходные материалы всех бактериальных изолятов поддерживали при -80 ° C до проведения молекулярной работы.

2.3. Экстракция геномной ДНК, ERIC-PCR Fingerprinting и кластерный анализ

Изолятов A. baumannii наносили штрихами из замороженных исходных материалов, и петлю бактерий инокулировали в агар Лурия-Бертани (LB), используя 300 мкл л стерильной водой молекулярного качества и выращивали в течение ночи при 37 ° C.Геномную ДНК экстрагировали из ночных культур, и праймеры, используемые для ERIC-PCR, были такими, как описано Versalovic et al. [18, 19]. Был проведен иерархический кластерный анализ, и образцы были сгруппированы в подмножества на основе попарного сходства их профилей ERIC. Использовали программу кластерного анализа отпечатков пальцев из пакета BioNumerics версии 7.6.3 (Applied Maths, Бельгия). Дендрограммы были созданы для гелей ERIC-PCR с использованием коэффициента корреляции Пирсона в качестве меры сходства и метода невзвешенных парных групп (UPGMA) в качестве алгоритма кластеризации с оптимизацией 1% и допуском положения 1%. A. baumannii штаммов со сходством более 95% считались клонально связанными.

3. Результаты
3.1. Клинико-эпидемиологическая характеристика случаев
A. baumannii

80 нерепликативных штаммов устойчивых к имипенему A. baumannii были получены от пациентов интенсивной терапии в период с 2016 по 2018 гг. Клинические и демографические характеристики пациентов с этими штаммами приведены в таблице 1. Средний возраст составлял 60 лет, а среднее время пребывания в отделении интенсивной терапии до изоляции составляло 15 дней.Не все экологические культуры A. baumannii произрастали в течение периода исследования. Распределение первого клинического образца, на котором выросли КРАБ из случая, поступившего в реанимацию в течение 3 лет, показано в Таблице 2.

27 (3346,7)

Нет (%)

Колонизация 31 (38,8)
Инфекция 49 (61,2)
Мужчины 42 (52.5)
Женщины 38 (47,5)
Возраст в годах
<15 1 (1,2)
15–44 25551 20 ( 45–64 27 (33,8)
≥65 32 (40)
Медицинское отделение интенсивной терапии 53 (66,3)
Оперативное отделение интенсивной терапии

27 (3346,7)
27 (3346,7) Общая смертность за 30 дней 15 (18.8)

30-дневная общая смертность от 13 случаев инфекций кровотока, вызванных устойчивостью к карбапенемам A. baumannii , составила 61,5%.
9046 905 905 905 0

Год 2016 2017 2018 Всего

Кровь 2 9 2 13
Кожа / мягкие ткани 1 1 1 3
2
Всего 8 48 24 80

3.2. Паттерны фенотипической восприимчивости штаммов
A. baumannii

Результаты испытаний на чувствительность для обычно тестируемых агентов в соответствии с CLSI для всех A. baumannii и бактериемических штаммов показаны в таблицах 3 и 4, соответственно, с> 50%. перекрестная резистентность отмечена для 2 испытанных карбапенемов. Таблица 5 демонстрирует значения MIC тигециклина, полученные с помощью теста E (контрольная точка составляет 2 мкг мкг / мл).


Противомикробное средство Уровни чувствительности%

Цефтазидим
Имипенем 0
Меропенем 43.8
Гентамицин 53,8
Амикацин 53,8
Ципрофлоксацин 0
левофлоксацин 5
триметоприм-сульфаметоксазол 8,8


Антимикробных ставков Восприимчивости%

Цефтазидит 0
Цефепит 0
пиперациллин-тазобакты 0
Имипенем 0
Меропенем 46.2
Гентамицин 46,2
Амикацин 46,2
Ципрофлоксацин 0
левофлоксацин 7,7
триметоприм-сульфаметоксазол 23,1

3

МИК ( µ г / мл) Кол-во изолятов (%) Кумулятивное кол-воизолятов (%)

1 12 (15) 12 (15)
2 31 (38,8) 43 (53,8)
26 (32,5) 69 (86,3)
4 4 (5) 73 (91,3)
6 1 (1,3) 74 (92,5)62
2 (2,5) 76 (95)
16 3 (3.8) 79 (98,8)
32 1 (1,3) 80 (100)

3.3. Генотипическая характеристика
изолятов A. baumannii с помощью ERIC-PCR

ERIC-PCR фингерпринтинг сгруппированных устойчивых к имипенему штаммов A. baumannii , выделенных из разных образцов у пациентов, поступивших в реанимацию в течение 3 лет в разных кластерах (рис. ). Среди 80 собранных штаммов A.baumannii , только 2 пары штаммов оказались схожими генотипами ERIC-PCR. № штамма. 134 и 312 были взяты из трахеи двух пациентов, поступивших как в медицинское отделение интенсивной терапии в мае 2017 года и в октябре 2018 года, в то время как изоляты 42 и 123 были взяты из образцов трахеи пациентов, госпитализированных в январе 2017 года (медицинское отделение интенсивной терапии) и апреле 2017 года (хирургическое отделение интенсивной терапии), соответственно. .


4. Обсуждение

Молекулярные инструменты могут способствовать пониманию популяционного генетического разнообразия и распространения множественной лекарственной устойчивости A.baumannii в отделениях интенсивной терапии. В этом исследовании 80 штаммов устойчивых к имипенему A. baumannii были собраны у пациентов в критическом состоянии в течение 3 лет (2016–2018 гг.), При этом большинство (61,2%) представляли истинные инфекции. Самая высокая частота штаммов, 60%, была получена в 2017 году, что может не обязательно отражать истинную заболеваемость на 1000 пациентов в день, поскольку на нее могут влиять дни пациентов. Большинство изолятов CRAB (77,5%) в нашем академическом учреждении были выделены из респираторных образцов (таблица 2), и все изоляты были устойчивы к одному или нескольким из трех или более классов протестированных антибиотиков, соответствующих определениям МЛУ или ШЛУ.Ранее было показано, что в учебных больницах, как правило, находится больше микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью, что требует принятия строгих мер инфекционного контроля [20].

КРАБ-инфекции несут высокую смертность, достигающую 61,8% [21, 22]. В частности, бактериальные инфекции имеют плохие результаты [22, 23]. Мы обнаружили высокую общую смертность с изолятами крови, но необходимо учитывать, что эти случаи КРАБ составляли лишь небольшую часть (16,3%) исследуемой когорты. Ограниченные терапевтические возможности играют роль в ухудшении прогноза.В нашем исследовании большинство из 13 бактериемических штаммов были устойчивы к большинству протестированных противомикробных препаратов при клиническом применении (Таблица 4). Тигециклин является одним из немногих эффективных препаратов в случаях небактериемических инфекций, вызываемых широко лекарственной устойчивостью A. baumannii. Для препарата A. baumannii контрольных точек по CLSI не существует. В таблице 5 мы продемонстрировали, что половина штаммов CRAB в отделениях интенсивной терапии нашего учреждения имеет более высокие МИК к препарату (> 2 µ г / мл).Важным моментом является возможное завышение МИК тигециклина методами, широко используемыми в диагностических лабораториях, а именно тестом E и автоматизированными системами, например, VITEK 2 [24]. Хотя аминогликозиды проявили активность in vitro против половины изолятов CRAB, использование этого класса препаратов у пациентов в критическом состоянии затруднено из-за плохой проницаемости в ткани и токсичности для почек [25].

Анализ клональных отношений между патогенами важен для лучшего понимания молекулярной эпидемиологии.Генотипирование более информативно, чем антибиотики, для мониторинга распространения штаммов и раннего выявления вспышек, но большинство описанных методов сложны и трудозатратны [26]. Простота ERIC-PCR делает ее полезным и недорогим инструментом для снятия отпечатков пальцев на нозокомиальные патогены, и было показано, что она является отличительной для A. baumannii с высокой воспроизводимостью в сочетании с использованием программного обеспечения для постобработки данных [27]. В настоящем исследовании ERIC-PCR была проведена для типирования 80 штаммов A.baumannii . Анализ отпечатков пальцев выявил разнообразие генотипов изолятов КРАБ в отделениях интенсивной терапии. Несколько изолятов, которые были неотличимы на 95%, не были связаны друг с другом в хронологическом и пространственном отношении, что делало их прямое распространение менее вероятным. Это также подтверждается их различным статусом чувствительности к меропенему и МИК к карбапенемам и тигециклину. Предыдущая опубликованная в 2014 году работа Aljindan et al. исследовали 59 штаммов в нашем центре и предположили генетическое сходство между штаммами A.baumannii , но это исследование проводилось в течение 9 месяцев, охватило всю больницу и включало штаммы, чувствительные к карбапенемам, с использованием порога отсечения 90% [19]. Поскольку представленная когорта представляет собой однородную коллекцию случаев интенсивной терапии, наши наблюдения показывают, что основные движущие силы устойчивости к карбапенемам у A. baumannii в этих случаях могут быть связаны с более ранним воздействием препаратов, что, как отмечается, чаще встречается у пациентов. тяжелобольные [20, 28].Эту гипотезу необходимо дополнительно проверить, сопоставив потребление противомикробных препаратов в этих единицах и частоту выделения КРАБ. Непрерывный эпиднадзор и эффективные программы контроля над антимикробными препаратами должны дополнять меры инфекционного контроля для предотвращения распространения клонов CRAB в критических областях [28].

Основными ограничениями исследования являются небольшое количество штаммов и недоступность данных о чувствительности к колистину, которые требуют тестирования на микроразбавление бульона, которое не проводится в обычных лабораториях.Визуальное считывание полос ERIC-PCR подвержено ошибкам и дает сомнительные результаты, в то время как использование расширенного программного обеспечения анализа, такого как в этом исследовании, может решить проблему, поскольку программное обеспечение имеет преимущество нормализации сгенерированных полос ERIC-PCR. а значит, меньше фонового шума и более точное сравнение. В будущем необходимы более масштабные исследования для изучения потребления противомикробных препаратов в отделениях интенсивной терапии и его влияния на изоляцию КРАБ различных генотипов.

5.Заключение

В этом исследовании мы показали, что анализ отпечатков пальцев ERIC-PCR 80 штаммов IRAB, собранных за 3-летний период у пациентов в отделении интенсивной терапии, выявил различные закономерности, в то время как резервуары окружающей среды не могли быть идентифицированы. Они, вероятно, представляют собой генетически неродственные штаммы, о чем свидетельствует их фенотипическая антибиограмма и иерархическая кластеризация профилей ERIC-PCR. Полученные данные можно рассматривать как отражение поликлональности в описанных условиях. Необходима дальнейшая работа для изучения разнообразия КРАБ в больничных отделениях с высоким уровнем потребления противомикробных препаратов.

Доступность данных

Данные, использованные для подтверждения выводов этого исследования, можно получить у соответствующего автора по запросу.

Этическое одобрение

Институциональный наблюдательный совет Университета имама Абдулрахмана бин Фейсала предоставил этическое одобрение для этого исследования (IRB ‐ PGS-2018-03-178).

Конфликт интересов

Автор заявляет об отсутствии конфликта интересов.

Вклад авторов

Все авторы в равной степени внесли свой вклад в анализ данных, составление и критическую редакцию документа и согласились нести ответственность за все аспекты работы.

Благодарности

Авторы благодарят деканат научных исследований МАС за финансирование этой работы. Авторы также благодарят г-на Унтая Рашана и других технических сотрудников отдела диагностической микробиологии в KFHU за техническую помощь в некоторых аспектах лабораторной работы и извлечения данных для целей этого исследования, д-ра Насрелдина Эльхади за его помощь в проведении ERIC-PCR. техника и прикладная математика для предоставления программного обеспечения биоинформатики и их технической поддержки.Эта работа финансировалась за счет гранта деканата по исследованиям Университета имама Абдулрахмана бин Фейсала.

Повреждение хряща

Скользящие поверхности каждого сустава покрыты гиалиновым хрящом.

Этот тип хряща отличается высокой прочностью на сжатие, но низкой прочностью на разрыв.

Причина повреждения хрящевого слоя может быть разнообразной. Несчастные случаи, чрезмерное использование, неправильная нагрузка на определенные участки хряща с угловой деформацией верхней и / или голени (см. Раздел: коррекция оси), смещение коленной чашечки (см. Раздел: коленная чашечка), ревматические и воспалительные заболевания и другие факторы

Дефекты хряща в коленном суставе. Боль может привести к сильной взаимозаменяемой боли, «Bamstigkeitsgefühl» (претенциозное ощущение) в колене из-за выпота в сустав (= раздражение) и значительно ухудшить работоспособность.

Показаны нормальный, гладкий и твердый гиалиновый хрящ бедра и повреждение хряща на стадии I и II.

За характер и серьезность жалоб несут ответственность местоположение, размер и степень глубины повреждения.

Симптомы часто не коррелируют со степенью повреждения. Они очень индивидуальны и почти не подчиняются никаким законам.

Есть четыре стадии повреждения хряща, из которых стадии III и IV уже представляют собой переход в остеоартроз.Имена происходят из США и носят образный характер:

.

I — Блистеры (вздутие, размягчение)

II — Мишка Тедди

III — Мясо краба

IV — Луна

Гиалиновый хрящ (хондромаляция) II стадии, истрепанная дегенерация без значительной потери толщины хряща

Хондромаляция III стадии, глубокие складки, отслоения хрящевых участков, уменьшение толщины хрящей и истертые участки рисуют красочную картину увеличивающегося разрушения суставов

Хондромаляция IV стадии.Хряща больше нет. Разрушение суставов и истирание костей. Деформация суставов и переход в тяжелый остеоартроз.

Принцип лечения

Артроскопическое лечение направлено на прекращение продолжающейся стимуляции сустава абразивным материалом шероховатой поверхности хряща, чтобы остановить прогрессирование разрушения хряща, насколько это возможно, а также активировать репарационную активность. Обычно этап 1 не требует лечения, на этапах II и III используется моторизованный рисовальный нож для сглаживания хрящевой поверхности, удаляются подорванные края и мертвый хрящ (этап IV, см. Раздел остеоартроз).


Сильно ушибленное правое колено: с внутренней стороны можно увидеть мертвые хрящевые части (стадия III). Внизу обнаженная мертвая кость без хрящевой выстилки (стадия IV), дополнительный разрыв наружной доли мениска.

Благодаря производству гладкой поверхности хряща истирание уменьшается, а хроническое раздражение проходит.

С помощью высокочастотного устройства можно создавать гладкие, «герметичные» хрящевые поверхности.

Последующий уход

Сразу же послеоперационный период начинается с лечения пакетами со льдом, противоотечными препаратами и, возможно, моторизованной пассивной шиной (CPM).На первом этапе лечения сразу после операции на хряще большое значение имеют движение (массаж и улучшение питания неперфузируемого хряща) и низкая нагрузка. Ногу можно использовать после операции (ходьбы). Профилактический уход от трех до шести недель.

Работоспособность

В зависимости от возраста пациента, степени и степени повреждения хряща пациенты, ведущие сидячий образ жизни, могут работать примерно через две недели, пациенты с физической активностью могут вернуться к работе примерно через пять-шесть недель.

Спортивные способности

Из-за разнообразия повреждений хряща этот момент следует особенно обсуждать индивидуально с учетом возраста, массы тела, работоспособности мышц и занятий спортом.

Результаты

Хорошие результаты получаются после сглаживания хряща примерно в 90 процентах случаев на стадии II и, тем не менее, в 75 процентах случаев на стадии III.

Осложнения

Осложнения сравнимы с осложнениями после артроскопического лечения мениска, только частота тромбозов увеличивается примерно до 3 процентов из-за более длительных выделений.

Добавить комментарий